蛛丝蛋白的碱性纯化的制作方法

技术特征：
1.一种从宿主细胞培养物中分离出重组蛛丝蛋白的方法，其包括：a.获得细胞培养物，其中所述细胞培养物包含宿主细胞和生长培养基，其中所述宿主细胞表达重组蛛丝蛋白；b.收集所述细胞培养物的包含所述重组蛛丝蛋白的部分；c.在碱性条件下在水溶液中孵育所述细胞培养物的所述部分，从而在所述水溶液中增溶所述重组蛛丝蛋白；以及d.从所述水溶液中分离出所述重组蛛丝蛋白，从而产生分离的重组蛛丝蛋白样品。2.如权利要求1所述的方法，其中所述碱性条件包括从9至14的碱性ph值。3.如权利要求2所述的方法，其中所述碱性ph值是从11至12。4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分离的重组蛛丝蛋白是全长重组蛛丝蛋白。5.如权利要求4所述的方法，其中所述分离的重组蛛丝蛋白样品包含相对于总的分离的重组蛛丝蛋白的至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的全长重组蛛丝蛋白。6.如权利要求5所述的方法，其中全长重组蛛丝蛋白的百分比是使用蛋白质印迹法测量的。7.如权利要求5所述的方法，其中全长重组蛛丝蛋白的百分比是用尺寸排阻色谱法测量的。8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分离的重组蛛丝蛋白的纯度为5-10％、10-15％、15-20％、20-25％、25-30％、30-35％、35-40％、45-50％、50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％、75-80％、80-85％、85-90％、90-95％或95-100％。9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述分离的重组蛛丝蛋白的收率相对于通过尿素或硫氰酸胍法分离的重组蛛丝为至少50-55％、55-60％、60-65％、65-70％、70-75％、75-80％、80-85％、85-90％、09-95％或95-100％。10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中分离所述重组蛛丝蛋白包括通过改变所述水溶液的所述碱性条件来沉淀所述重组蛛丝蛋白。11.如权利要求10所述的方法，其中改变所述碱性条件包括将所述细胞培养物的所述部分的所述碱性ph值调节至从4至10的降低的ph值。12.如权利要求11所述的方法，其中所述降低的ph值为4、5、6、7、8、9或10的ph值。13.如权利要求11所述的方法，其中所述降低的ph值是从6至7的ph值。14.如权利要求10-13中任一项所述的方法，其中调节所述碱性ph值包括添加酸到所述水溶液中。15.如权利要求14所述的方法，其中所述酸为h2so4。16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞培养物的所述部分包含上清液、全细胞肉汤或细胞团块。17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中收集所述细胞培养物的所述部分包括从所述生长培养基中移出所述宿主细胞，并在所述水溶液中重构所述宿主细胞。18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中收集所述细胞培养物的所述部分包括
裂解所述宿主细胞。19.如权利要求18所述的方法，其中裂解包括热处理、剪切破坏、物理匀质化、超声或化学匀质化。20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞培养物的所述部分包含来自所述细胞培养物的所述宿主细胞和所述生长培养基。21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水溶液包含稀释的生长培养基。22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在碱性条件下孵育所述细胞培养物的所述部分被执行10至120分钟。23.如权利要求22所述的方法，其中在碱性条件下孵育所述细胞培养物的所述部分被执行至少10分钟、至少15分钟、至少30分钟、至少45分钟、至少60分钟、至少75分钟、至少90分钟、至少105分钟或至少120分钟。24.如权利要求22所述的方法，其中在碱性条件下孵育所述细胞培养物的所述部分被执行15至30分钟。25.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在碱性条件下孵育所述细胞培养物的所述部分进一步包括搅拌所述细胞培养物的所述部分。26.如前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括在碱性条件下从所述水溶液中除去未被增溶的生物质。27.如权利要求26所述的方法，其中除去所述未被增溶的生物质包括过滤、离心、重力沉降、吸附、透析或相分离。28.如权利要求27所述的方法，其中所述过滤是超滤、微量过滤或透析过滤。29.如权利要求26-28中任一项所述的方法，其中除去所述未被增溶的生物质被重复至少一次。30.如前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括在分离所述重组蛛丝蛋白之前或者在分离所述重组蛛丝蛋白之后除去杂质。31.如权利要求30所述的方法，其中除去杂质包括过滤、离心、重力沉降、吸附、透析或相分离。32.如权利要求31所述的方法，其中所述过滤是超滤、微量过滤或透析过滤。33.如权利要求31所述的方法，其中所述离心是超速离心或透析离心。34.如权利要求31所述的方法，其中所述吸附是炭吸附。35.如权利要求31-34中任一项所述的方法，其中去除杂质被重复至少一次。36.如前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括浓缩所述分离的重组蛛丝蛋白以产生浓缩的蛛丝蛋白。37.如权利要求36所述的方法，其中浓缩包括沉淀、过滤、超滤、离心、透析、蒸发或冻干。38.如前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括干燥所述分离的重组蛛丝蛋白。39.如前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括由所述分离的重组蛛丝产生丝纤维。40.如权利要求39所述的方法，其中所述丝纤维包括至少19cn/tex的韧性。
41.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述重组蛛丝蛋白为18b或p0。42.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞培养物包含真菌细胞、细菌细胞或酵母细胞。43.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述酵母细胞为巴斯德毕氏酵母细胞。44.一种分离重组蛛丝蛋白的方法，所述方法包括a.获得细胞培养物，其中所述细胞培养物包含宿主细胞和生长培养基，其中所述宿主细胞表达重组蛛丝蛋白；b.收集所述细胞培养物的包含所述重组蛛丝蛋白的部分；c.在碱性条件下在水溶液中孵育所述细胞培养物的所述部分，从而在所述水溶液中增溶所述重组蛛丝蛋白；d.调节所述水溶液至非碱性ph值，从而沉淀所述被增溶的重组蛛丝蛋白；以及e.从细胞培养物的所述部分中分离出所述重组蛛丝蛋白，从而产生分离的重组蛛丝蛋白。45.一种组合物，其包含通过前述权利要求中任一项所述的方法产生的重组蛛丝蛋白。46.如权利要求45所述的组合物，其中所述重组蛛丝包含至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的全长重组蛛丝。47.一种丝纤维，其包含通过权利要求1-44中任一项所述的方法产生的重组蛛丝蛋白。48.如权利要求47所述的丝纤维，其中所述丝纤维包括至少19cn/tex的韧性。49.一种组合物，其包含在碱性缓冲液中的细胞培养物，所述细胞培养物包含生长培养基和宿主细胞，所述宿主细胞包含重组蛛丝蛋白。50.如权利要求45-49中任一项所述的组合物，其中所述碱性缓冲液具有从9至14的ph值。51.如权利要求50所述的组合物，其中所述ph值是从11至12。52.如权利要求49-51中任一项所述的组合物，其中所述蛛丝蛋白为18b或p0。53.如权利要求49-52中任一项所述的组合物，其中所述细胞培养物包含真菌细胞、细菌细胞或酵母细胞。54.如权利要求53所述的组合物，其中所述细菌细胞是大肠埃希菌细胞。55.如权利要求53所述的组合物，其中所述酵母细胞是巴斯德毕氏酵母细胞。

技术总结
本公开涉及生产和纯化合成嵌段共聚物蛋白的方法、用于分泌所述合成嵌段共聚物蛋白的表达构建体、用于生产所述合成嵌段共聚物蛋白的重组微生物以及包含这些蛋白的合成纤维，所述合成纤维再现了天然丝的许多特性。述合成纤维再现了天然丝的许多特性。述合成纤维再现了天然丝的许多特性。


技术研发人员：梅嘉恒 R
受保护的技术使用者：保尔特纺织品公司
技术研发日：2019.11.26
技术公布日：2022/4/26